HEPES用于乳酸脱氢酶检测试剂盒：反应体系的pH稳定支持
发布时间：
2026-01-06
在体外诊断中，乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase, LDH）是临床常用的生化指标之一，可用于辅助评估心肌损伤、肝功能异常、溶血性疾病等情况。其检测结果的稳定性与试剂体系的设计密切相关。在检测过程中，除了酶和辅酶外，缓冲体系的作用同样重要。HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）作为一种常用缓冲剂，已在部分乳酸脱氢酶检测试剂盒中得到应用，用于维持反应环境的pH稳定。
乳酸脱氢酶检测的基本原理
乳酸脱氢酶的活性检测通常采用动力学法。在反应体系中，LDH催化L-乳酸转化为丙酮酸，同时将NAD⁺还原为NADH。NADH在340 nm波长处有吸收峰，通过检测该波长下吸光度的上升速率，可计算出LDH的活性。
该反应对pH较为敏感。研究表明，LDH的适宜pH范围在6.5-8之间。若反应体系的pH偏离此范围，可能影响酶的构象，导致催化效率降低。此外，反应过程中可能产生氢离子，若无有效缓冲，体系pH会逐渐下降，影响反应的线性。
HEPES在反应体系中的作用
常用的缓冲剂包括磷酸盐、Tris和HEPES等。磷酸盐在某些条件下可能与金属离子形成沉淀，影响检测结果；Tris的pKa约为8.1，在生理pH范围内缓冲能力有限，且对温度变化较敏感。HEPES与LDH反应所需的pH范围匹配较好。它在6.8–8.2的pH区间内具有较强的缓冲能力，能够减少因反应进行或外界干扰引起的pH波动。此外，HEPES不与金属离子形成络合物，对紫外光吸收较小，且对酶活性无明显抑制作用。
HEPES对试剂性能的影响
在LDH检测试剂中使用HEPES，有助于维持反应体系的pH稳定，从而保证反应速率的可重复性。稳定的缓冲环境也有助于提高不同批次试剂之间的性能一致性。由于HEPES化学性质较稳定，在2–8℃储存条件下不易分解，对于不同类型的样本，如血清、血浆等，HEPES也能在一定范围内维持体系pH，减少样本基质带来的影响。
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乳酸脱氢酶,生物缓冲剂
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